通常情況下，對于常用的反相色譜柱出現(xiàn)了嚴(yán)重的柱效降低、分離度差時(shí)，可以試試按照以下流程來對色譜柱進(jìn)行沖洗、再生：
1、20倍柱體積水：乙腈= 95%：5% （用于移除系統(tǒng)中緩沖鹽，可根據(jù)常用緩沖鹽濃度調(diào)整比例）
2、20倍柱體積 乙腈
3、5倍柱體積 異丙醇
4、20倍柱體積 正己烷
5、20倍柱體積 乙腈
6、20倍柱體積 水：乙腈=95%：5% （可與步驟1保持相同的比例）
7、用所需的流動(dòng)相比例重新平衡色譜柱
關(guān)于色譜柱的沖洗再生，基本上都是個(gè)性化的，也有很多相關(guān)文章，每支色譜柱的實(shí)際情況都會(huì)有所不同，適的再生條件需要經(jīng)過實(shí)際摸索和調(diào)整。
在色譜柱沖洗時(shí)，很多實(shí)驗(yàn)室習(xí)慣用沖洗時(shí)間來評(píng)價(jià)是不是達(dá)到我們想要的效果。例如某位師傅告訴你把這個(gè)柱子沖半個(gè)小時(shí)就可以了。嚴(yán)格來講色譜柱的沖洗應(yīng)該使用沖洗的溶劑體積來評(píng)價(jià)沖洗效果，柱體積的計(jì)算公式如下：


例如一根4.6mm內(nèi)徑，150mm柱長的色譜柱柱體積為：


如果要用20倍柱體積的乙腈沖洗色譜柱就需要約34mL的乙腈，假設(shè)柱流量是1mL/min，那就要用乙腈沖洗34分鐘，當(dāng)柱流量是1.5 mL/min時(shí)就需要用乙腈沖洗約23分鐘。